[자연과학][일반화학] Alkaline Phosphatase[AP]의 정제

1. 실험제목

- Alkaline Phosphatase(AP)의 정제

2. 실험목적

- Ion-exchange chromatography에 의한 단백질 정제 원리를 이해하고, DEAE anion exchange column을 이용한 AP 단백질의 정제기법을 습득하게 된다.

3. 실험원리

(1) Alkaline Phosphatase(AP)

- Phosphatase는 인산화 되어 있는 분자에서 인산기를 제거하는 효소이다. 대개 생체내의 효소는 특정한 기질과만 반응하는 기질 특이성을 지니는데, AP같은 경우에는 특정한 기질과만 반응하지 않는 nonspecific phosphatase에 해당한다. 이름에 alkaline이 붙는 이유는 이 효소가 작용할 수 있는 최적의 환경이 염기성이기 때문이다.
AP는 보통 homo-dimer로 작용하며 크기는 140-160 kDa정도이다. (-)charge를 띠며, 75~85도의 온도에서도 activity를 유지한다.

(2) Chromatography

- 크로마토그래피는 이동상과 고정상을 이용하여 혼합물을 분리해내는 방법이다. 고정상(stationary phase)은 고체이고, 이동상(mobile phase)는 액체 또는 기체이다. 혼합물에 있는 각 성분이 두 상과 친화력이 다르면 계를 통과할 때 다른 속도로 움…(생략)

(3) Column chromatography (관 크로마토그래피)

(4) Ion-exchange chromatograpy (이온 교환 크로마토그래피)

4. 실험 기구 및 재료

(1) 실험 기구