title
mini preparation
object
DNAÀÇ Å©±âÂ÷ÀÌ¿¡ ÀÇÇØ ºÐ¸®ÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÎ alkaline lysis method¸¦ ÀÌ¿ëÇÏ¿© Á¤Á¦µÈ DNAÀÇ ¾çÀ» ºÒ¸°´Ù.
introduction
À¯ÀüÀÚ ÀçÁ¶ÇÕÀº DNA¸¦ ¸ñÀû¿¡ µû¶ó ÀûÀýÈ÷ ÀÚ¸£°í ºÙ¿©¼ À¯Àü¹°ÁúÀ» ¿øÇÏ´Â ÇüÅ·Π°³Á¶½ÃÅ°´Â °úÁ¤ÀÌ´Ù. °¡Àå ±âº»ÀûÀÎ DNAÁ¶ÀÛ±â¹ýÀÎ ÀçÁ¶ÇÕDNA(recombination DNA) ±â¼úÀº ÇÊ¿ä·Î ÇÏ´Â ¿ÜºÎ DNA´ÜÆíÀ» vector¶ó°í ºÎ¸£´Â ¿î¹ÝÀÚ plasmid DNAºÐÀÚ¿¡ ¿¬°á½ÃÄÑ ¸ñÀûÀ¸·Î ÇÏ´Â DNAºÎºÐ¸¸ ÁõÆø½Ãų ¼ö ÀÖ´Â »õ·Î¿î ÀçÁ¶ÇÕ DNA¸¦ ¸¸µå´Â °ÍÀÌ´Ù. Áï, Á¦ÇÑÈ¿¼Ò¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ¸ñÀû DNA¿Í plasmid DNA¸¦ À߶ó ÀÌ µÎ ºÐÀÚ¸¦ ligase¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ¿¬°á½ÃÅ°´Â °ÍÀÌ´Ù. ÀÌ·¸°Ô ¹ÝÀÀ½ÃŲ DNA¿ë¾×À» ´ëÀå±Õ¿¡ ÇüÁúÀüȯ ½ÃŲ´Ù. ÀÌ ¶§ ¿øÇÏ´Â DNAºÐÀÚ°¡ ¸¸µé¾îÁ³´ÂÁö¸¦ Á¶»çÇϱâ À§ÇÏ¿© ÇüÁúÀüȯü Áß ¿©·¯ colony¸¦ Èĺ¸·Î¼ ÅÃÇÏ¿© ÇüÁúÀüȯü ³»¿¡ µé¾îÀÖ´Â plasmid DNA¸¦ Á¶»çÇÏ¿©¾ßÇÑ´Ù. ÀÌ ¶§ plasmid DNAºÐ¸®¿¡ »ç¿ëµÇ´Â preparation(of plasmid DNA) ¹æ¹ýÀº ¸¹Àº È常¦ ºü¸¥ ½Ã°£¿¡ ºÐ¼®Çϴµ¥ À¯¿ëÇÏ°Ô »ç¿ëµÇ¾îÁø´Ù.
ÁÖ·Î minipreparation(mini prep.)À̶ó°í ºÎ¸£´Â ÀÌ ¹æ¹ýÀº plasmid¡¦(»ý·«)
1. ¼¼Æ÷º®À» ±ü´Ù. ÀÌ ¶§ ¼¼Æ÷¸·Àº À¯ÁöµÇµµ·Ï ÇÑ´Ù. ¼¼Æ÷º®À» ±ºµ¥±ºµ¥ ¹«³Ê¶ß¸®´Â ¹°ÁúÀº EDTAÀ̸ç, ÀÌ ¶§ sucrose³ª glucose°¡ ÷°¡µÇ¾î ¼¼Æ÷ÀÇ ÇüŸ¦ À¯ÁöÇϵµ·Ï ÇÑ´Ù. ¶§·Î´Â lysozymeÀ» ¾²±âµµ ÇÑ´Ù.
2. ¼¼Æ÷¸·À» Á¶½É½º·´°Ô ±ú¼ Å©±â°¡ Å« chromosomal DNA°¡ ³Ê¹« Àß°Ô Á¶°¢³ª´Â °Í(³Ê¹« Àß°Ô Á¶°¢³ª°Ô µÇ¸é, ±×·Î ÀÎÇØ plasmid DNAµµ ±úÁ®¹ö¸®°Ô µÈ´Ù.)À» ¹æÁöÇÏ¸é¼ ¿ë¾×¿¡ DNA¸¦ ³ëÃâ½ÃŲ´Ù. SDS¶ó´Â detergent(ÀÌ°ÍÀ» ÀÌ¿ëÇÏ¿© ¼¼Æ÷¸¦ ±ü´Ù. ÀÌ°ÍÀÌ Áö¹æ ¼ººÐÀ» ³ìÀ̱⠶§¹®ÀÌ´Ù.) °¡ ¼¼Æ÷¸·À» ³ì¿©¹ö¸®¸é¼ ¾È¿¡ ÀÖ´ø ¼¼Æ÷ ³»¿ë¹°ÀÌ ¿ë¾×À¸·Î Èê·¯³ª¿À°Ô µÈ´Ù. ÀÌ ¶§ ¹Ù·Î alkaline ¿ë¾×¿¡ ³ëÃâµÈ DNA´Â denature(´ÙÇ®¸®´Â °Í)µÈ´Ù. ±×·¯³ª Å©±â°¡ ÀÛÀº supercolied plasmid DNA´Â Àß denatureµÇÁö ¾Ê´Â´Ù.
3. pH¸¦ ±Þ°ÝÇÏ°Ô 7.0±îÁö º¹±¸½ÃÅ°¸é Å©±â°¡ ÀÛ°í supercoiled formÀ» À¯ÁöÇÏ°í ÀÖ´ø plasmid´Â ºñ±³Àû renaturationÀÌ Àß µÇÁö¸¸ chromosomal DNA´Â renatureµÇÁö ¸øÇÏ°í ¾û±â°Ô µÈ´Ù. ÀÌ·¸°Ô ¾û±ä chromosomal DNA¸¦ ¿ø½ÉºÐ¸®·Î Á¦°ÅÇÑ´Ù. ¿ì¸®°¡ ¾ò°íÀÚ ÇÏ´Â plasmid DNA´Â »óÃþ¾×¿¡ Á¸ÀçÇÏ°Ô µÈ´Ù.
|