?Á¦ ¸ñ: Mini-Prep (Hybrid-Q Plasmid Rapid prep Kit)
1.½ÇÇè¸ñÀû
Mini PrepÀ̶õ DNA-isolation¿¡ ÀÖ´Â ¿ø¸® Áß Çϳª·Î Plasmid DNAºÐ¸®¿¡ »ç¿ëµÇ´Â ¹æ¹ýÀÌ¸ç ¸¹Àº È常¦ ºü¸¥ ½Ã°£ ³»¿¡ ºÐ¼®ÇÏ´Â ¹æ¹ýÀÌ´Ù. PrepÀº PrepartionÀÇ ¾àÀÚ.DNA¸¦ ¼Ò·®À¸·Î ÃßÃâÇÑ´Ù´Â ÀǹÌ. ÁÖ·Î ÀÌ¿ëµÇ´Â Alkylation lysis(denaturation)¹ý°ú boiling method, Iithium method¹ýÀÌ ÀÖ´Ù.
2.½ÇÇè¿ø¸®
DNA¿Í plasmidÀÇ °íÀ¯ Çüű¸Á¶ ¿ø¸®¿¡ ÀÇÇÑ ºÐ¸® ¹æ¹ýÀ¸·Î½á ¼¼Æ÷³»¿¡ DNA´Â ÀϹÝÀûÀÎ double-helixÀÇ ÇüŸ¦ °¡Áö´Â ¹Ý¸é plasmid´Â supercoiledÇüŸ¦ °¡ÁüÀ¸·Î½á PHº¯È¿¡ µû¶ó¼µµ plasmidÀÇ ÇüÅÂ¿Í ±¸Á¶°¡ Å©°Ô º¯ÇÏÁö ¾Ê¾Æ ¼ø¼öÇÑ plasmid¸¸À» ÃßÃâÇÏ´Â ±¸Á¶Àû ±âº»¿ø¸®¿¡ ÀÇÇÑ ¹æ¹ýÀÌ´Ù.
3.½ÇÇè¹æ¹ý
1. 3ml bacterial culture (DH5a T-vector OmPGRP)¸¦ 12000rpm¿¡¼ 1ºÐ°£ centrifuge (2ml e-tube¿¡ 1.6ml¾¿ ¿©·¯ ¹ø ³ª´©¾î cell down ½ÃŲ´Ù.)
¡ØOmPGRP´Â ¿°±â½ÖÀÌ 600°³ÀÎ À¯ÀüÀÚ. ´ëÀå±Õ¿¡ ³Ö°í »©³»´Â ½ÇÇè centrifuge: ¿ø½ÉºÐ¸®. °¢ tube¿¡ ÀÚ½ÅÀÇ À̸§À» ½á³õ´Â´Ù.
2. »óÃþ¾×À» ¹ö¸®°í, 250§¡ÀÇ S1 buffer (Resuspension buffer)¸¦ ³Ö¾î pelletÀ» re¡¦(»ý·«)
|